石蜡切片和冷冻切片

在组织学中，常用石蜡切片和冷冻切片。两者各有利弊，实验应用也各不相同。例如，石蜡切片常用于免疫组织化学实验，而冷冻切片常用于免疫荧光实验。两个实验均应用免疫学的基本原理，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应开发标记抗体的显色试剂，测定组织和细胞的胞内蛋白，并进行了定位、定性和相对定量研究。

下面详细介绍了下两种方法的异同

一.石蜡切片

石蜡切片组织学是常规切片技术中应用最广泛的方法。常用于观察正常细胞和组织的形态结构。一般组织从材料到玻片固定需要几天时间，但标本可以长期保存，是永久性的显微玻片标本。

一个

确定的

:将新鲜组织切成小块，并在4%多聚甲醛中固定过夜。

原理:固定时间取决于料块的大小和松散程度。固定化可以固化组织中的物质成分，停止细胞的所有代谢过程，防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持细胞在体内的结构。同时可以使组织变硬，便于切片。

2

脱水:

为了减少组织材料的急剧收缩，应按照从低浓度到高浓度的顺序使用70%、85%、95%和纯酒精，每次1小时。

原理:固定的组织材料需要去除组织中残留的固定液及其晶体沉淀，否则会影响后期的染色效果。原因是透明剂多为苯，苯和石蜡都不能与水相融合，导致水不能完全去除，苯不能浸入。酒精是一种常见的脱水剂，可与水相和透明剂混合。

三

透明度:

常用的透明剂是二甲苯，它是石蜡的溶剂。这一步最好在通风的厨房进行。

原理:纯酒精不能用石蜡溶解，需要用酒精和石蜡都能溶解的溶剂代替组织中的酒精。据说材料块在用透明剂浸渍的过程中是透明的。

四

浸蜡:

首先，将组织材料块浸泡在等量的熔化石蜡和二甲苯中1小时。

将它们依次移入两个熔化的石蜡浴中，浸泡约1小时。

原理:石蜡浸入组织中支撑。

五

包埋:用少许热蜡溶液快速贴附包埋盒底部，然后放入速冻台固定石蜡。

六

切片:

切片刀是否锋利，蜡块硬度是否合适，直接影响切片质量。蜡块可以放入冷水中，改变蜡块的硬度。通常切片厚度为5微米，切片用刷子铺在37度的水浴中。

七

修补并烘烤:

将载玻片放入水浴中捞起，直到载玻片平放，然后在37℃的培养箱中干燥。

八

切片脱蜡和水合:

将干燥的切片在二甲苯中脱蜡，然后用95%、85%和70%的纯醇从高浓度到低浓度依次水合。

原理:切片在水溶性染料溶液中染色前需要脱蜡和水合。用二甲苯脱蜡，逐步通过纯酒精和梯度酒精，直至蒸馏出水。

九

染色:

染色的目的是使细胞组织中不同的结构呈现不同的颜色以供观察。

经典苏木精和伊红:细胞核被苏木精染成紫蓝色，大部分细胞质和非细胞成分被伊红染成粉红色。实验操作简单。

免疫组织化学:是指用显色剂标记的特异性抗体通过抗原抗体反应和原位组织化学的显色反应。

二.冷冻切片

冷冻切片的优点是可以很好地保存组织的抗原免疫活性，在免疫组织化学中不需要抗原修复。缺点是冰晶容易在细胞内形成，破坏细胞结构，可能造成抗原分散。由于其制备过程比石蜡切片更快、更简单，因此常被用于外科手术中的快速病理诊断。

与石蜡切片相比，冷冻切片简单易行。固定脱水后，在包埋介质中固定后，可在冷冻切片机上切片。部分新鲜标本可直接取用，在冷冻托盘上涂包埋剂，然后立即冷冻切片。

冷冻切片最重要的是防止样品中出现冰晶。一般通过速冻可以使组织温度急剧下降，减少样品中冰晶的形成。也可将组织置于20% ~ 30%蔗糖溶液中1 ~ 3天，组织中的水分可被高渗溶液吸收，降低组织含水量。

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